۱۵

TEMED

۶

قبل از ریختن ژل Stacking الکل سطح ژل خارج گردید.
بعد از ریختن ژل شانه داخل آن قرار داده شد و پس از ۴۵ دقیقه ژل پلیمریزه گردید.
پس از سپری شدن زمان پلیمریزاسیون ژل دوم، شانه به آهستگی خارج گردید.
الکترود در تانک الکتروفورز قرار گرفته و با بافر تانک ((Running Buffer10% راه ­اندازی شد.
نمونه­ها به نسبت حجم مورد نظر برای هم غلظت بودن همه آنها با سرنگ همیلتون داخل چاهک­ها ریخته ­شد.

دستگاه ا لکتروفورز (Biorad) با ۹۰ ولت راه اندازی ­گردید.
پس از گذشت حدودا ۲ ساعت (تا جایی نمونه­ها از ژل خارج نمی­شدند) دستگاه باید خاموش می­شد.
الکترود از تانک خارج ­شد و به آهستگی ژل برداشته شد، ژل­ها به دو روش رنگ­آمیزی گردیدند (Walker J.M., 2002).
۳-۹-۳-۱. رنگ­­آمیزی کوماسی بلو R-250
یک ساعت ژل داخل محلول رنگ­آمیزی قرار گرفت (جدول۳-۶).
سپس ژل به وسیله محلول رنگ­بری، رنگ­بری شد (جدول۳-۷).
۳-۹-۳-۲. رنگ­آمیزی Blue Silver Staining
یک ساعت ژل داخل محلول تثبیت قرار گرفت (جدول۳-۸).
سپس ژل ۳ بار و به فواصل ۱۰ دقیقه با آب­مقطر شستشو داده شد.
ژل over night در محلول رنگ آمیزی قرار ­گرفت (جدول۳-۹).
سپس ژل با آب­ دوبار تقطیر که حاوی ۱% اسیداستیک بوده، شستشو داده شد.
۳-۱۰. تصویر برداری و آنالیز ژل­ها
از ژل­ها توسط اسکنر Image scanner, Ge Health care, USA تصویر برداری و تفاوت­های حاصله مورد بررسی قرار ­گرفت.
فصل چهارم
نتایج
۴-۱. جمعیت مورد مطالعه
نمونه­های ارسالی به بخش مایکوباکتریولوژی انسیتو پاستور، بطور روزانه و منظم از افراد مشکوک طی فروردین ماه تا شهریور ماه سال ۱۳۹۲ جمع­آوری گردیده، در یخچال در دمای ۴ درجه نگهداری شد همزمان با آن پرسشنامه­ای جهت بررسی داده ­های دموگرافیک از جمله سن بیمار، شغل، جنسیت و دیگر موارد اپیدمیولوژیک ضروری تهیه شد. در طی این مدت تعداد بیماران مراجعه کننده به بخش سل، ۲۱۵۴ نفر بوده که ۱۴۸ نفر دارای کشت مثبت M. tubeculosis بوده که از این تعداد، ۹۲ نفر اسمیر مثبت و ۵۶ نفر اسمیر منفی داشته اند (نمودار ۴-۱).
مطالعه حاضر به منظور دستیابی به سویه­های M. tubeculosis و M. bovis روی ۱۰۰ نمونه تصادفی از این تعداد انجام شد.
در این دوره زمانی مواردی از آلودگی با M. bovis مشاهده نشد و لذا از ۵ سویه انتخابی از سال­های ۹۰ و ۹۱ استفاده گردید.
نمودار۴-۱: نتایج کشت مثبت
۴-۲. درصد سویه­های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس جمع­آوری شده از بیماران با توجه به موضع جداسازی
بر اساس اطلاعات آماری بدست آمده ۸۰% نمونه­ها خلط، ۷% از نمونه­ها شستشوی معده، ۶% نمونه­ها غدد زیر بغل، ۵/۳% بیوپسی، ۲% مفصل و ۵/۱% شستشوی برونش بود.
جدول۴-۱: درصد نمونه­های بالینی

موضع جداسازی

درصد

خلط

۸۰%

شستشوی معده

۷%

غددزیربغل

۶%